cds設計
⑴ 用rna反轉錄的cdna克隆基因的cds全長怎麼設計引物
有基因序列號,你就可以直接上genebank下載其序列,下載到全序列,你需要擴增的專CDS區,也就是編碼區,可以全外屬顯子擴增,這樣簡單一點,也可以做cDNA克隆,然後再做,前者的話就可以直接根據其基因序列NG號設計引物,如果是做CDNA的話就根據其mRNA的序列NM號設計引物. 你是根據其cDNA設計的引物,你需要下提取mRNA,然後反轉錄成cDNA,才能夠擴增出來.如果是根據其基因序列設計的,你需要先將你的目的序列定位到GENE上,然後設計引物
⑵ 已經知道一段基因的CDS, 我要擴全長,請問怎麼設計引物呢 是不是在兩端各取20幾個bp就可以了呢》
如果不考慮CG 、 二聚體話,直接在CDS的上下游設計匹配的18-24bp的鹼基作為引物即可PCR獲得CDS,我們以前也這樣做過,有時候是可以的。你可以嘗試一下。
希望能幫到你!
⑶ 請問引物設計是用mRNA和其內部的CDS為模板都可以嗎
mRNA和CDS的序列是抄一致襲的,只不過是RNA和DNA的U和T的區別。
PCR是合成DNA,當然是用CDS了。CDS是編碼序列,染色體的DNA是體內轉錄後剪切才表達,構建質粒的DNA在體外細胞內培養剪切不了。
酶切位點的選擇是根據構建質粒所用的載體上的酶切位點,和CDS上的酶切位點決定的。
原則是:1.選擇載體上位置相差不少於6個鹼基的兩個酶切位點,
2.兩種酶要有最適緩沖液,
3.兩種酶不是同尾酶,即不能切相似的序列,
4.兩種酶最好比較常用,這樣價格不貴,容易買到,
5.最後也是非常重要的,要選擇目的基因即CDS上沒有的酶切位點,這個可以在Google搜索Web cutter 2.0這個網頁,輸入CDS序列,查看CDS上的酶切位點,選擇可以使用的酶切位點。
⑷ RT-pcr或者qRT-PCR引物設計是用ORF來做模板還是CDs
qRT-PCR的引物設計使用CDS,最好擴增的片段能包含一個內含子剪切位點,這樣可以通過電泳排除擴增基因組DNA的可能性,讓定量PCR更准確
⑸ 一個物種的cds序列可以用來設計熒光定量PCR的引物嗎求高手指點迷津啊,先謝謝了!!!!
可以啊 只要是mRNA上的就可以了 一般擴增產物長度150-200最好
⑹ 設計一個光敏電阻(cds)自動點滅電路 要求白天使其關閉,夜晚使其打開。並附上電路圖與計算過程
如果你是在做題目,光敏電阻的變化公式應該會給出的,這種涉及光做功的東西水平有點高
⑺ 已知CDS 如何設計引物P出全長
一般就是在CDS序列的上下游分別設計和序列互補的18-24bp的引物即可。
但考慮的PCR的特異性等,建議用primer premier引物設計軟體設計最好的一對引物。
希望能幫到你!
⑻ 什麼是CDS
內容分發服務( Distribution Service)的縮寫,CDS.
內容分發服務是互聯網的一項新技術。是否具備CDS已成為衡量IDC綜合能力的標志之一;是否具備全國或全球范圍內的內容分發網路(CDN,Content Distribution Network)已成為ICP等選擇合作夥伴的考慮因素之一。本文將著重介紹CDS的技術原理及應用狀況。
內容分發技術主要是針對各類門戶網站。電子商務網站、專業類以及社區類網站而提供的服務。通過此種服務使各地的Internet客戶在訪問這些網站時,可以訪問最接近本地緩存伺服器中緩存的內容,從而縮短請求響應時間和網路延遲,減輕網站伺服器的負載。目前,內容分發技術已被國際上許多IDC服務提供商應用,如Adero、CacheWare、Exdous、Digital Isand、Mirror Image Internet等。據Forrester研究機構調查:Yahoo.com網站的頁面訪問量達到約6億次/天,其中48%的頁面訪問是由其租用Akamai公司的緩存伺服器來完成的。由此可見,內容分發技術不僅給採用此技術的網站帶來被訪速度上的優勢,而且也為提供此項增值服務的IDC服務供應商帶來可觀的經濟效益。我國的各大基礎網路運營商也已開始逐步建立並提供各種形式的CDS。1 CDS技術眾所周知,ISP所提供的上網帶寬以及網站接入帶寬所造成的網路延遲是影響上網訪問速度的主要因素。在有效解決Internet帶寬問題的同時,專家們也在研究如何使網站伺服器與各地的客戶盡可能地「接近」,從而減少訪問請求和響應所途經的網路節點,達到縮短網路時延的目的。
縮短網站與客戶之間「距離」的方案主要有兩種。
方案一:在各地建立網站遠程鏡像站點。網站異地鏡像服務的實現方式是:通過更新數據中心用戶DNS中的域名記錄,把廣域網負載平衡設備設置為用戶應用伺服器的指定授權域名解析伺服器,從而當Internet客戶訪問該網站時,廣域網負載平衡設備即會接收到該Internet客戶的域名解析請求,並依據一定的負載平衡演算法為該客戶就近訪問該網站「指明道路」。
方案二:採用內容分發技術。內容分發技術結合了計算機緩存技術和分布技術,將緩存伺服器分布於Internet各大骨幹節點上,同時利用其他廣域網的負載平衡技術使各地的客戶在訪問站點時首先訪問距離自己最「近」的緩存伺服器,從而得到最快的響應。所謂最「近」,就是網路延遲時間最小。
CDN系統根據不同的環節採用不同的技術,主要涉及到以下4種技術。
(1)廣域網負載平衡技術。使Internet客戶可就近訪問緩存伺服器,從而減少網路延時。廣域網負載平衡技術依據以下原理工作。·廣域網負載平衡設備查詢各個節點的狀態信息;·客戶端在訪問服務前,首先向廣域網負載平衡設備發起域名解析請求;·廣域網負載平衡設備將最「近」的IP地址作為域名解析結果返回給客戶端;·客戶端依據得到的IP地址請求訪問最「近」的節點;最「近」的節點響應客戶端的請求。
(2)本地負載平衡技術。用於實現緩存伺服器的負載平衡和高可用性。在各地節點上實現緩存伺服器組的負載平衡,不僅保證了緩存伺服器的冗餘設計和高可用性,還可以基於輪詢方式或響應時間方式分擔來自用戶端的Web請求。
(3)緩存技術。通過在IDC前端部署高速緩存伺服器並採用反向代理模式,可加快伺服器的響應時間。緩存伺服器的作用是把用戶訪問過的內容保存在伺服器中,以便其他用戶再次訪問該內容時可以從就近的緩存伺服器中得到,從而縮短伺服器的響應時間。而反向代理模式是一種「拉」的技術,即當即用戶請求訪問的內容在緩存伺服器節點中並不存在時(即用戶首次訪問該內容時),緩存伺服器則從源Web伺服器中下載得到。或者說,緩存伺服器是一種被動的方式,用戶不訪問,緩存伺服器就不會事先主動地保存相關內容。
(4)內容分發和管理技術。內容分發和管理技術能夠主動、實時地更新緩存伺服器的內容,使緩存伺服器的內容與源Web伺服器一致、保持同步。對於內容經常更新或網頁文件較大的網站,採用這種方式效果更為顯著。內容分發和管理技術是有別於反向代理緩存技術的一項新技術。內容分發和管理技術是一種「推」的技術。它主要包含內容分發和內容管理兩項功能。
·內容分發功能:一旦源Web伺服器的內容被更新,內容分發系統立即主動將其「推」到分布在各地的緩存伺服器中,使各緩存伺服器的內容與源Web伺服器一致;或在設定的某個時間段或網路流量較小時將源Web伺服器中的內容主動分發到各地的緩存伺服器中,使訪問網站新內容或已更新頁面的用戶不必因緩存伺服器臨時下載新的網頁內容而等待過長的時間。
·內容管理功能:又稱「日誌網關」。它的主要作用是從分布式的緩存伺服器中收集網站內容。頁面和Web對象的訪問記錄,並集中式的監管。統計和分析所有緩存伺服器的當前狀態和性能,以利於有效地管理CDN。當網站內容發生變更時,內容分發系統能夠對緩存伺服器中過期的內容定期地進行自動刪除。
2.技術方案比較
採用遠程鏡像站點方案,各網站公司可以自主地選擇在用戶群大的地區設立鏡像站點。但這種方案需要在異地的數據中心建設與原伺服器一樣的系統,並支付相應的主機託管費用。因此初期投資大、維護成本高,而且隨著異地鏡像站點的不斷增多,成本將直線上升。採用CDS方案有利於ISP、ICP、IDC以及最終用戶等。對最終用戶來說,CDS縮短了其訪問等待的時間,減少了上網費用;對ISP來說,由於用戶大部分的Web請求都由本地緩存伺服器響應,從而為ISP節省了帶寬資源;對IDC來說,內容分發服務作為一項增值業務提供給各網站公司,為IDC獲得新的利潤增長點;更為重要的是,CDS在提高網站客戶滿意度的同時,還從一定程度上減輕了網站源Web伺服器的負載,降低了網站在異地建設和維護遠程鏡像站點的成本,因此使.com和企業網站等樂於租用此項服務。內容分發技術是網路加速技術的一個重要補充,但不是唯一形式。內容分發服務與異地鏡像服務兩者具有一定的互補性,針對不同的用戶可採用不同的服務。例如,對於具有相當實力和規模的大型網站來說,可根據網站的目標客戶群選擇在國內或國際重點中心城市建立自己的異地鏡像站點,保證整個網站系統的廣域網上的高可用性;而CDS主要是面對中、小型網站,或是大型網站在非中心城市的需求,從而達到利用較少的投資和維護成本即可提高各地訪問速度的目的。
3 建立CDN的原則
建立CDN必須具備相當的條件。首先要有豐富的互聯網網路資源,包括網路覆蓋、國內網間帶寬、國際出口帶寬等;其次在各地都應具有一定數量和規模的IDC。對於在全國范圍內具備各種規模的IDC運營商來說,可以在CDN覆蓋城市的數據中心採用廣域網負載平衡、區域網負載平衡、緩存伺服器以及內容分發和管理等設備,形成覆蓋全國主要城市的CDN。CDN原則上應該易於配置、管理和維護,具有較強的可擴展性、可用性和性能。此外,整個系統應具有強大的流量統計和狀態監控管理能力。
為了使國內的CDN可以擴展到國外,可以考慮與境外運營商合作建立覆蓋境外的內容分發網路。同時也可以與已建立了全球范圍CDN的國標袒營商合作,把其網路延伸至國內主要城市。這樣既可以便國內用戶高速訪問國外知名站點,也可以使國外用戶高速地訪問國內優秀的中文網站。具體採取何種合作方式,需要依據網路的投資額以及市場的需求來定。同時,在建立內容分發系統時需要特別注意的是,為保證本內容分發系統能夠與國外眾多CDN具有一定的兼容性,系統應盡可能支持國際上的主流內容分發服務組織聯盟。
4 CDN應用實例
不同的CDN提供商實現的方式以及規模各不相同。如果要選擇一個長期的合作夥伴,必須充分考慮其CDN的技術特點以及網路規模。以下是CDN的應用實例。Adero公司已在全球范圍建立了電子商務應用服務。該公司可在30多個國家開展服務,並且目前還在繼續擴展其網路覆蓋范圍。Adero的GlobalWise應用系統和GlobalWise商務系統是針對一些已有現存網路的公司與其全球范圍的客戶溝通、交流而設計的。CacheWare公司採用從源伺服器到邊緣伺服器的特別方式實現內容分發和緩存技術。該公司的CacheWare Content Manager產品作為內容管理器在源服務雜和邊緣伺服器之間起到中介的作用,減輕了源伺服器的負載。CacheWare將最新的內容「推」到邊緣伺服器上,而不是被動地等待邊緣伺服器的請求。Cidera公司的網路是基於衛星系統的網路,該網路專長於傳送數據流。目前Cidera公司已在北美和歐洲地區建立了300個以上的節點,2001年該網路將延伸至拉丁美洲和亞洲地區。除傳送流媒體外,Cidera公司還提供靜態內容緩存技術。它所提供的Usenet能夠在ISP下載超大容量數據的同時,客戶也在發送大容量文件而不阻塞網路伺服器。Mirror Image Internet公司建立了一個覆蓋北美、歐洲和亞洲的全球性CDN。該公司專長於緩存技術,它所建立的CAP(Content Access Points)網路利用現有的IDC提供鏡像。緩存和內容分發等加速服務。其特點是ICP無需修改自己的網頁,只要進行DNS Setting,就可以在Mirror公司覆蓋全球的23個地區加快其網站的被訪速度。ICP可以向CAP發送既定的命令從而刪除CAP上的過期內容。
⑼ 如何設計基因cds序列的pcr引物
提取細胞總RNA然後用試劑盒反轉錄成cDNA,用cDNA作為模板擴增基因的CDS區,然後想要轉專染進細胞中。比屬如MYOD1基因,首先在NCBI找到它的mRNA序列,然後找到它的CDS序列,全部復制下來,在primer
5.0
中。正向引物直接從CDS的第一個核酸開始(比如18bp),反向引物從CDS最後一個核酸開始,向前選擇序列(比如17bp),調節2個引物的長度(不一定要一致),盡量避免錯配,二聚體,產生錯的產物即可。最後在引物的5『端添加酶切位點以及保護鹼基。
⑽ 設計引物用cds序列和cdna序列的區別
cDNA和mRNA的序列是互補的,如果用兩個引物,最後的兩條DNA序列分別對應於mRNA和cDNA中的一段。由於引物方向從5『至3』,所以兩個引物對應於mRNA和cDNA中相應序列即可。