單克隆抗體制備技術的發明者

⑴ 下圖是單克隆抗體制備過程示意圖。請據圖回答： (1)__________技術是單克隆抗體技術的基礎

(1)動物細胞培養
(2)雜交瘤細胞
(3)特異性強，靈敏度高，並可大量制備
(4)在體外大量增殖；分泌特異性抗體

⑵ 如圖為單克隆抗體制備流程示意圖．（1）______技術是單克隆抗體技術的基礎．（2）細胞融合是隨機的過程，

（1）單克隆來抗體制備的技術涉源及動物細胞融合和動物細胞培養，基礎是動物細胞培養．
（2）據圖分析，骨髓瘤細胞在HAT培養基上無法生長，所以骨髓瘤細胞之間形成的融合細胞也不能在該培養基上存活；淋巴細胞和淋巴細胞自身融合的細胞能在HAT培養基上正常生活，但不能增殖，所以經過培養後，HAT培養基上沒有淋巴細胞和淋巴細胞自身融合的細胞；骨髓瘤細胞與淋巴細胞之間形成的雜交瘤細胞能在HAT培養基上正常生活，並無限增殖．在培養過程中為防止雜菌感染，應向培養液中添加抗生素；其體外培養需用CO^₂培養箱，其中CO^₂的主要作用是維持培養液PH．
（3）植物細胞原生質體融合常用物理法和化學法誘導劑，動物細胞融合還可以採用滅活的病毒．
（4）雜交瘤細胞從培養基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是主動運輸，需要載體和能量．
（5）單克隆抗體的優點是特異性強、靈敏度高、可大量制備．
故答案為：
（1）動物細胞培養
（2）篩選出雜交瘤細胞抗生素維持培養液PH
（3）滅活的病毒
（4）主動運輸
（5）特異性強、靈敏度高、可大量制備．

⑶ 下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。 (1)___________技術是單克隆抗體技術的基礎。(2)根

⑷ 下列關於單克隆抗體的敘述錯誤的是單克隆抗體制備技術的基礎是動物細胞培養技

A、單克隆來抗體具有特異自性強、靈敏度高，並可能大量制備等優點，A正確；
B、生物導彈=單克隆抗體+放射性同位素、化學葯物或細胞毒素，藉助單克隆抗體的定位導向作用將葯物定向帶到癌細胞，在原位殺死癌細胞，B錯誤；
C、單克隆抗體可作為診斷試劑，也可用於治療疾病和運載葯物，C正確；
D、生產單克隆抗體的過程中，需要利用動物細胞培養技術對雜交瘤細胞進行篩選，以及利用該技術對雜交瘤細胞進行體外培養等，D正確．
故選：B．

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⑹ 單克隆抗體制備的基本原理與過程有什麼意義

單克隆抗體制備的原理：

B淋巴細胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細胞的這種能力和量是有限的,不可能持續分化增殖下去，因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的、將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力，又具有產生特異性抗體的B淋巴細胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養或注入小鼠體內即可獲得大量的高效價、單一的特異性抗體.這種技術即稱為單克隆抗體技術。

單克隆抗體制備的過程：

1. 免疫動物

   免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，並分化成為致敏B淋巴細胞。

2. 細胞融合

   採用二氧化碳氣體處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內擠壓研磨，制備脾細胞懸液。 將准備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，並加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合，形成雜交瘤細胞。

3. 選擇性培養

   選擇性培養的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般採用HAT選擇性培養基。在HAT培養基中，未融合的骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，不能利用補救途徑合成DNA而死亡。 未融合的淋巴細胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細胞由於從脾細胞獲得了次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，並具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養基中存活和增殖。

4. 雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化

   在HAT培養基中生長的雜交瘤細胞，只有少數是分泌預定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常採用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養。採用靈敏、快速、特異的免疫學方法，篩選出能產生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，並進行克隆擴增。經過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子量後，及時進行凍存。

5. 單克隆抗體的大量制備

   單克隆抗體的大量制備主要採用動物體內誘生法和體外培養法。

   (1)體內誘生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進行預處理。1-2周後，腹腔內接種雜交瘤細胞。雜交瘤細胞在小鼠腹腔內增殖，並產生和分泌單克隆抗體。約1-2周，可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體。

   (2)體外培養法 將雜交瘤細胞置於培養瓶中進行培養。在培養過程中，雜交瘤細胞產生並分泌單克隆抗體，收集培養上清液，離心去除細胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產生的抗體量有限。各種新型培養技術和裝置不斷出現，大大提高了抗體的生產量。

單克隆抗體制備的意義：

用於以下各種生命科學實驗並具有醫用價值

（1）沉澱反應：Precipitation reaction

（2）凝集實驗：haemaglutination

（3）放射免疫學方法檢測免疫復合物

（4） 流式細胞儀：用於細胞的分型和細胞分離.

（5）ELISA 等免疫學檢測

（6）BIAcore biosensor:檢測Ab-Ag或與蛋白的親和力 .

（7）免疫印記（western blotting)

（8） 免疫沉澱：

（9） 親和層析：分離蛋白質

（10） 磁珠分離細胞

（11）臨床疾病的診斷和治療；

⑺ 單克隆抗體制備的基本原理與過程有什麼意義

哈哈~我們剛考到這題
原理：
B淋巴細胞在抗原的刺激下，能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細胞的這種能力和量是有限的，不可能持續分化增殖下去，因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力，又具有產生特異性抗體的B淋巴細胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養或注入小鼠體內即可獲得大量的高效價、單一的特異性抗體。這種技術即稱為單克隆抗體技術。
過程
1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多採用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決於所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可採用脾內直接免疫法。
2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞不能在含8-AG的培養基中存活）。骨髓瘤細胞用10%小牛血清的培養液在細胞培養瓶中培養，融合前24h換液一次，使骨髓瘤細胞處於對數生長期。
3）細胞融合的關鍵:
1技術上的誤差常常導致融合的失敗。例如，供者淋巴細胞沒有查到免疫應答。這必然要失敗的。
2融合試驗最大的失敗原因是污染，融合成功的關鍵是提供一個干凈的環境，以及適宜的無菌操作技術。

4）陽性克隆的篩選 應盡早進行。通常在融合後10天作第一次檢測，過早容易出現假陽性。檢測方法應靈敏、准確、而且簡便快速。具體應用的方法應根據抗原的性質，以及所需單克隆抗體的功能進行選擇。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫熒光法等。其中ELISA法最簡便，RIA法最准確。陽性克隆的篩選應進行多次，均陽性時才確定為陽性克隆進行擴增。
5）克隆化 克隆化的目的是為了獲得單一細胞系的群體。克隆化應盡早進行並反復篩選。這是因為初期的雜交瘤細胞是不穩定的，有丟失染色體的傾向。反復克隆化後可獲得穩定的雜交瘤細胞株。克隆化的方法很多，而最常用的是有限稀釋法。
（1）顯微操作法：在顯微鏡下取單細胞，然後進行單細胞培養。這種方法操作復雜，效率低，故不常用。
（2）有限稀釋法：將對數生長期的雜交瘤細胞用培養液作一定的稀釋後，按每孔1個細胞接種在培養皿中，細胞增值後成為單克隆細胞系。第一次克隆化時加一定量的飼養細胞。由於第一次克隆化生長的細胞不能保證單克隆化，所以為獲得穩定的單克隆細胞株需經2～3次的再克隆才成。應該注意的是，每次克隆化過程中所有有意義的細胞都應冷凍保存，以便重復檢查，避免丟失有意義的細胞。
（3）軟瓊脂法：將雜交瘤細胞稀釋到一定密度，然後與瓊脂混懸。在瓊脂中的細胞不能自由移動，彼此互不相混，從而達到單細胞培養的目的。但此法不如有限稀釋法好。
（4）熒光激光細胞分類法：用抗原包被的熒光乳膠微球標記雜交瘤細胞，然後根據抗原與雜交瘤細胞結合的特異性選出細胞，並進行單細胞培養。

6）細胞的凍存與復甦
7）大規模單克隆抗體的制備 選出的陽性細胞株應及早進行抗體制備，因為融合細胞隨培養時間延長，發生污染、染包體丟失和細胞死亡的機率增加。抗體制備有兩種方法。一是增量培養法，即將雜交瘤細胞在體外培養，在培養液中分離單克隆抗體。該法需用特殊的儀器設備，一般應用無血清培養基，以利於單克隆抗體的濃縮和純化。最普遍採用的是小鼠腹腔接種法。選用BALB/c小鼠或其親代小鼠，先用降植烷或液體石蠟行小鼠腹腔注射，一周後將雜交瘤細胞接種到小鼠腹腔中去。通常在接種一周後即有明顯的腹水產生，每隻小鼠可收集5～10ml的腹水，有時甚至超過40ml。該法制備的腹水抗體含量高，每毫升可達數毫克甚至數十毫克水平。此外，腹水中的雜蛋白也較少，便於抗體的純化。
意義：
用於以下各種生命科學實驗並具有醫用價值
（1）沉澱反應：Precipitation reaction
（2）凝集實驗：haemaglutination
（3）放射免疫學方法檢測免疫復合物
（4） 流式細胞儀：用於細胞的分型和細胞分離。
（5）ELISA 等免疫學檢測
（6）BIAcore biosensor:檢測Ab-Ag或與蛋白的
親和力 。
(7) 免疫印記（western blotting)
（8） 免疫沉澱：
（9） 親和層析：分離蛋白質
（10） 磁珠分離細胞
（11）臨床疾病的診斷和治療；

⑻ 什麼技術是單克隆抗體制備的基礎

最基礎的是動物細胞培養，操作程序是先取漿細胞與骨髓瘤細胞單獨，然後誘導融合，兩次版篩選權後得到雜交瘤細胞最後在體內或者體外培養，提取單克隆抗體。
新人教版選修三教材第52頁中有介紹，動物細胞工程的常用技術有動物細胞培養、動物細胞核移植、動物細胞融合、單克隆抗體技術。其中動物細胞培養技術是動物細胞工程的基礎。
所以涉及到單克隆抗體技術、克隆羊等技術的時候，基礎都是動物細胞培養，而問到單克隆抗體和克隆羊技術的關鍵技術時才回答單克隆抗體的關鍵技術是動物細胞融合，克隆羊技術的關鍵是核移植。

⑼ 簡述人工制備單克隆抗體的方法

單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常採用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。
制備過程:
1. 免疫動物
免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，並分化成為致敏B淋巴細胞。

2.細胞融合
採用二氧化碳氣體處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內擠壓研磨，制備脾細胞懸液。 將准備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，並加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合，形成雜交瘤細胞。

3.選擇性培養
選擇性培養的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般採用HAT選擇性培養基。在HAT培養基中，未融合的骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，不能利用補救途徑合成DNA而死亡。 未融合的淋巴細胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細胞由於從脾細胞獲得了次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，並具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養基中存活和增殖。

4.雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化
在HAT培養基中生長的雜交瘤細胞，只有少數是分泌預定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常採用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養。採用靈敏、快速、特異的免疫學方法，篩選出能產生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，並進行克隆擴增。經過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子量後，及時進行凍存。

5.單克隆抗體的大量制備
單克隆抗體的大量制備主要採用動物體內誘生法和體外培養法。

(1)體內誘生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進行預處理。1-2周後，腹腔內接種雜交瘤細胞。雜交瘤細胞在小鼠腹腔內增殖，並產生和分泌單克隆抗體。約1-2周，可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體。

(2)體外培養法 將雜交瘤細胞置於培養瓶中進行培養。在培養過程中，雜交瘤細胞產生並分泌單克隆抗體，收集培養上清液，離心去除細胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產生的抗體量有限。各種新型培養技術和裝置不斷出現，大大提高了抗體的生產量。

⑽ 單克隆抗體的制備步驟

1、免疫動物的選擇：

免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的過程。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，並分化成為致敏B淋巴細胞。

2、細胞融合：

採用二氧化碳氣體處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內擠壓研磨，制備脾細胞懸液。 將准備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，並加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合，形成雜交瘤細胞。

3、選擇性培養：

選擇性培養的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般採用HAT選擇性培養基。

4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化：

在HAT培養基中生長的雜交瘤細胞，只有少數是分泌預定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常採用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養。

5、單克隆抗體的大量制備：

單克隆抗體的大量制備主要採用動物體內誘生法和體外培養法。

(10)單克隆抗體制備技術的發明者擴展閱讀：

單克隆抗體的優點：

1、雜交瘤可以在體外「永久」地存活並傳代，只要不發生細胞株的基因突變，就可以不斷地生產高特異性、高均一性的抗體。

2、可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。

3、由於可能得到「無限量」的均一性抗體，所以適用於以標記抗體為特點的免疫學分析方法。

4、由於單克隆抗體的高特異性和單一生物學功能，可用於體內的放射免疫顯像和免疫導向治療。