单克隆抗体制备技术的发明者

⑴ 下图是单克隆抗体制备过程示意图。请据图回答： (1)__________技术是单克隆抗体技术的基础

(1)动物细胞培养
(2)杂交瘤细胞
(3)特异性强，灵敏度高，并可大量制备
(4)在体外大量增殖；分泌特异性抗体

⑵ 如图为单克隆抗体制备流程示意图．（1）______技术是单克隆抗体技术的基础．（2）细胞融合是随机的过程，

（1）单克隆来抗体制备的技术涉源及动物细胞融合和动物细胞培养，基础是动物细胞培养．
（2）据图分析，骨髓瘤细胞在HAT培养基上无法生长，所以骨髓瘤细胞之间形成的融合细胞也不能在该培养基上存活；淋巴细胞和淋巴细胞自身融合的细胞能在HAT培养基上正常生活，但不能增殖，所以经过培养后，HAT培养基上没有淋巴细胞和淋巴细胞自身融合的细胞；骨髓瘤细胞与淋巴细胞之间形成的杂交瘤细胞能在HAT培养基上正常生活，并无限增殖．在培养过程中为防止杂菌感染，应向培养液中添加抗生素；其体外培养需用CO^₂培养箱，其中CO^₂的主要作用是维持培养液PH．
（3）植物细胞原生质体融合常用物理法和化学法诱导剂，动物细胞融合还可以采用灭活的病毒．
（4）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是主动运输，需要载体和能量．
（5）单克隆抗体的优点是特异性强、灵敏度高、可大量制备．
故答案为：
（1）动物细胞培养
（2）筛选出杂交瘤细胞抗生素维持培养液PH
（3）灭活的病毒
（4）主动运输
（5）特异性强、灵敏度高、可大量制备．

⑶ 下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。 (1)___________技术是单克隆抗体技术的基础。(2)根

⑷ 下列关于单克隆抗体的叙述错误的是单克隆抗体制备技术的基础是动物细胞培养技

A、单克隆来抗体具有特异自性强、灵敏度高，并可能大量制备等优点，A正确；
B、生物导弹=单克隆抗体+放射性同位素、化学药物或细胞毒素，借助单克隆抗体的定位导向作用将药物定向带到癌细胞，在原位杀死癌细胞，B错误；
C、单克隆抗体可作为诊断试剂，也可用于治疗疾病和运载药物，C正确；
D、生产单克隆抗体的过程中，需要利用动物细胞培养技术对杂交瘤细胞进行筛选，以及利用该技术对杂交瘤细胞进行体外培养等，D正确．
故选：B．

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⑹ 单克隆抗体制备的基本原理与过程有什么意义

单克隆抗体制备的原理：

B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力、B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的、将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体.这种技术即称为单克隆抗体技术。

单克隆抗体制备的过程：

1. 免疫动物

   免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

2. 细胞融合

   采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

3. 选择性培养

   选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。

4. 杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化

   在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。

5. 单克隆抗体的大量制备

   单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。

   (1)体内诱生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。

   (2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的生产量。

单克隆抗体制备的意义：

用于以下各种生命科学实验并具有医用价值

（1）沉淀反应：Precipitation reaction

（2）凝集实验：haemaglutination

（3）放射免疫学方法检测免疫复合物

（4） 流式细胞仪：用于细胞的分型和细胞分离.

（5）ELISA 等免疫学检测

（6）BIAcore biosensor:检测Ab-Ag或与蛋白的亲和力 .

（7）免疫印记（western blotting)

（8） 免疫沉淀：

（9） 亲和层析：分离蛋白质

（10） 磁珠分离细胞

（11）临床疾病的诊断和治疗；

⑺ 单克隆抗体制备的基本原理与过程有什么意义

哈哈~我们刚考到这题
原理：
B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。
过程
1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。
2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活）。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养，融合前24h换液一次，使骨髓瘤细胞处于对数生长期。
3）细胞融合的关键:
1技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。
2融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个干净的环境，以及适宜的无菌操作技术。

4）阳性克隆的筛选 应尽早进行。通常在融合后10天作第一次检测，过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质，以及所需单克隆抗体的功能进行选择。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA法最简便，RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次，均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。
5）克隆化 克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的，有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。克隆化的方法很多，而最常用的是有限稀释法。
（1）显微操作法：在显微镜下取单细胞，然后进行单细胞培养。这种方法操作复杂，效率低，故不常用。
（2）有限稀释法：将对数生长期的杂交瘤细胞用培养液作一定的稀释后，按每孔1个细胞接种在培养皿中，细胞增值后成为单克隆细胞系。第一次克隆化时加一定量的饲养细胞。由于第一次克隆化生长的细胞不能保证单克隆化，所以为获得稳定的单克隆细胞株需经2～3次的再克隆才成。应该注意的是，每次克隆化过程中所有有意义的细胞都应冷冻保存，以便重复检查，避免丢失有意义的细胞。
（3）软琼脂法：将杂交瘤细胞稀释到一定密度，然后与琼脂混悬。在琼脂中的细胞不能自由移动，彼此互不相混，从而达到单细胞培养的目的。但此法不如有限稀释法好。
（4）荧光激光细胞分类法：用抗原包被的荧光乳胶微球标记杂交瘤细胞，然后根据抗原与杂交瘤细胞结合的特异性选出细胞，并进行单细胞培养。

6）细胞的冻存与复苏
7）大规模单克隆抗体的制备 选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备，因为融合细胞随培养时间延长，发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加。抗体制备有两种方法。一是增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有时甚至超过40ml。该法制备的腹水抗体含量高，每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外，腹水中的杂蛋白也较少，便于抗体的纯化。
意义：
用于以下各种生命科学实验并具有医用价值
（1）沉淀反应：Precipitation reaction
（2）凝集实验：haemaglutination
（3）放射免疫学方法检测免疫复合物
（4） 流式细胞仪：用于细胞的分型和细胞分离。
（5）ELISA 等免疫学检测
（6）BIAcore biosensor:检测Ab-Ag或与蛋白的
亲和力 。
(7) 免疫印记（western blotting)
（8） 免疫沉淀：
（9） 亲和层析：分离蛋白质
（10） 磁珠分离细胞
（11）临床疾病的诊断和治疗；

⑻ 什么技术是单克隆抗体制备的基础

最基础的是动物细胞培养，操作程序是先取浆细胞与骨髓瘤细胞单独，然后诱导融合，两次版筛选权后得到杂交瘤细胞最后在体内或者体外培养，提取单克隆抗体。
新人教版选修三教材第52页中有介绍，动物细胞工程的常用技术有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、单克隆抗体技术。其中动物细胞培养技术是动物细胞工程的基础。
所以涉及到单克隆抗体技术、克隆羊等技术的时候，基础都是动物细胞培养，而问到单克隆抗体和克隆羊技术的关键技术时才回答单克隆抗体的关键技术是动物细胞融合，克隆羊技术的关键是核移植。

⑼ 简述人工制备单克隆抗体的方法

单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。
制备过程:
1. 免疫动物
免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

2.细胞融合
采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

3.选择性培养
选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。

4.杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化
在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。

5.单克隆抗体的大量制备
单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。

(1)体内诱生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。

(2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的生产量。

⑽ 单克隆抗体的制备步骤

1、免疫动物的选择：

免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

2、细胞融合：

采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

3、选择性培养：

选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。

4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化：

在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。

5、单克隆抗体的大量制备：

单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。

(10)单克隆抗体制备技术的发明者扩展阅读：

单克隆抗体的优点：

1、杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。

2、可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。

3、由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法。

4、由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。